TSKgel Protein A-5PW色谱柱

TSKgel Protein A-5PW色谱柱

TSKgel Protein A-5PW 色谱柱专为多种抗体的快速分离和准确定量而设计。从收获的细胞培养液中捕获并准确定量单克隆抗体，每次进样分析可在不到2分钟内完成。该色谱柱无需再生或清洗即可进行超过2000次进样分析。

TSKgel Protein A-5PW 色谱柱填充了高交联度的羟基化甲基丙烯酸聚合物珠，允许在色谱分析中使用高流速，同时保持色谱效率、峰宽和分离度。其重组蛋白A配基是经过密码子修饰的C结构域六聚体。这种增强型重组蛋白A配基通过多点附着键合在TSKgel 5PW 基质微球上，从而在0.1 mol/L NaOH溶液中具有优异的稳定性。

TSKgel Protein A-5PW 色谱柱具有宽泛的上样量范围，能够准确测定细胞培养液处理不同阶段中单克隆抗体的效价。其低水平的蛋白A脱落率，使其成为用于初步表征的小规模单克隆抗体纯化的理想选择。

TSKgel Protein A-5PW 是一款亲和（AFC）色谱柱，该色谱柱是在多孔亲水性聚合物基质的 TSKgel G5000PW 填料表面导入重组 Protein A 官能团，并充填到 PEEK 柱管内。

由于 Protein A 可与 IgG 的 Fc 区域发生特异性结合，所以Protein A可以从含有IgG和杂质的细胞培养上清液等样品中特异性吸附分离 IgG。此外，通过已知浓度的 IgG 制作校准

曲线，可以定量浓度未知样品中的 IgG。

TSKgel Protein A-5PW 色谱柱的基质、官能团和官能团键 合 方 法 与 散 装 填 料 TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F 相同。因此， 这 款 色谱柱与 TOYOPEARL  AF-rProtein A HC-650F 具有相似的分离选择性能。

由于基质的粒径大、机械强度高，该色谱柱可在高流速条件下使用，也可以用于 IgG 的高通量分析。而且，由于溶剂变化引起的填料溶胀效应比较小，所以可以在流动相中添

加有机溶剂。

此外，该色谱柱还采用了化学稳定性高、耐碱性的官能团，所以可使用 NaOH 水溶液进行清洗。使用 NaOH 水溶液清洗色谱柱时，请从进样阀注入 0.1 mol/L NaOH 水溶液 0.5

〜2 mL。

2-2. 标准分离条件

多数 IgG 在中性条件下（pH 7.0〜7.5）被 Protein A 吸附，在酸性条件下（pH 2.5〜3.5）洗脱，因此使用 TSKgel Protein A-5PW 分离抗体时，通常采用两种 pH 不同溶液的阶

梯式梯度洗脱法。

吸附和洗脱的流动相一般使用磷酸缓冲液，但流动相也可以使用低 pH 值的柠檬酸盐缓冲液。采用吸附缓冲液预先平衡色谱柱后（使用 5 倍以上柱体积的缓冲液平衡），进样

后，仅 IgG 被吸附在柱子上。之后，更换成洗脱用流动相，洗脱出 IgG。

可以在流动相内添加高浓度盐（比如 0.15 mol/L NaCl等），不过疏水性高的 IgG 在色谱柱上容易发生非特异性吸附，对此需多加留意。此外，分析疏水性高的 IgG 时，在平

衡液和洗脱液中添加乙醇等水溶性有机溶剂或精AN酸（0.2mol/L）可以有效抑制非特异性吸附。但是，上述情况可能会因更换流动相导致基线波动，因此在进样前，就请更

换流动相，并进行确认。

流动相示例

例 1

流动相 A：20 mmol/L 磷酸钠缓冲液，pH 7.4

流动相 B：20 mmol/L 磷酸钠缓冲液，pH 2.5

例 2

流动相 A：20 mmol/L 磷酸钠缓冲液，pH 7.4/乙醇=90/10（v/v）

流动相 B：20 mmol/L 磷酸钠缓冲液，pH 2.5/乙醇=90/10（v/v）

例 3

流动相 A：20 mmol/L 磷酸钠缓冲液，pH 7.4

流动相 B：50 mmol/L 柠檬酸钠缓冲液，pH 2.5

高性能亲和色谱柱 TSKgel Protein A-5PW色谱柱耐用性良好，可使用碱性溶液来清洗，适用于对含有较多杂质的细胞培养液中的IgG 进行快速和高精度定量。此外，IgG 的定量范围广，可用于分析培养初期的低浓度样品至高浓度样品。

TSKgel Protein A-5PW 产品规格与订购信息

规格参数

项目参数

孔径100 nm

粒径20 µm

pH稳定性2.5 - 12

排阻限1,000 kDa

配基重组蛋白A（C结构域六聚体）

配基密度0.9 - 1.0 g/L 凝胶

订购信息

产品编号 (P/N)描述尺寸

0023483TSKgel Protein A-5PW 色谱柱4.6 mm 内径 x 3.5 cm 长度

TSKgel Protein A-5PW色谱柱

南通海箬化学有限公司